下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
58.用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用______两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于__________________态的大肠杆菌。
59.为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_____________。
60.若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。
61.若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得 种大小不同的DNA片段。
考察知识点
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正确答案
BclI和HindⅢ 连接 感受
解析
选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHI可能使质粒中启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ。酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌。
考查方向
解题思路
不同限制酶识别的碱基序列不同，切割位点不同，但粘性末端可能相同。
易错点
注意保持基因结构的完整性。
正确答案
四环素 引物甲和引物丙
解析
为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素。PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链。
考查方向
解题思路
通过没有被破坏的标记基因进行筛选。
易错点
分清被破坏的抗性基因是否被破坏。
正确答案
解析
根据BamHI和Bcl I的酶切位点，BamHI酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为
考查方向
解题思路
根据BamHI和Bcl I的酶切位点，BamHI酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接。
易错点
分清不同限制酶识别的碱基序列和切出的粘性末端序列。
正确答案
7
解析
根据BamH 、Bcl I和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。
考查方向
解题思路
所有酶、一种酶等各种情况分别考虑即可。
易错点
注意是几种酶切的不同情况。