嗜热菌可以生活在98℃的高温环境中，研究发现其耐热性与基因H的表达产物有关。下图表示某研究小组利用大肠杆菌对H基因实行的克隆和表达过程，其中NdeⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为CA↓TATG、G↓AATTC、A↓AGCTT、G↓TCGAC。请分析回答：
50.图中的结构A是 ，其主要作用是 。一个完整的基因表达载体组成，除了质粒1中所示结构以外，还应该含有 。
51.用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用 两种限制酶进行切割，影响限制酶处理效果的因素可能有 （多选）。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
52.实验中发现，重组质粒导入大肠杆菌后H基因的表达效率很低，但在含有质粒2（辅助性质粒）的细胞中，H基因可以高效表达。为了筛选出转入了两种质粒的受体菌，应在筛选平板培养基中添加 ，整个实验过程应保持 操作。
53. PCR反应中引物的设计非常关键，据图分析，扩增H基因时应选择的一对引物是 。
正确答案
启动子 提供RNA聚合酶特异性识别结合位点，驱动基因转录 目的基因、终止子（和复制原点）
解析
对题图分析，由质粒1的结构、及质粒1和重组质粒上都具有A可推知，A是启动子，其作用是提供RNA聚合酶特异性识别结合位点，驱动基因转录。一个完整的基因表达载体组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因，而质粒1中已经含有启动子和标记基因（抗生素A抗性基因），故答案是目的基因、终止子。
考查方向
解题思路
对题图分析，推知A是启动子，根据基因工程的基础知识回答其作用及基因表达载体的组成。
正确答案
NdeⅠ EcoRⅠ ①②③④
解析
对质粒和H基因上的酶切位点进行分析，结合四种限制酶的识别序列和酶切位点，确定用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用NdeⅠ、EcoRⅠ两种限制酶进行切割，影响酶的因素都影响限制酶的处理效果，所以可能有温度、PH、酶浓度和底物的纯度，即①②③④。
考查方向
解题思路
对质粒和H基因上的酶切位点进行分析，结合四种限制酶的识别序列和酶切位点，确定用图中质粒1和H基因构建重组质粒，应选用NdeⅠ、EcoRⅠ两种限制酶进行切割，影响酶处理效果的因素可能有温度、PH、酶浓度和底物的纯度。
正确答案
抗生素A和抗生素B 无菌
解析
对两种质粒的标记基因进行分析后可知，质粒1上含有抗生素A的抗性基因，质粒2上含有抗生素B的抗性基因，所以应在筛选平板培养基中添加抗生素A和抗生素B。根据微生物的培养条件可知整个实验过程应保持无菌操作。
考查方向
解题思路
对两种质粒的标记基因进行分析后作答，根据微生物的培养条件可知应保持无菌操作。
正确答案
解析
分析切割质粒和目的基因的两种限制酶NdeⅠ、EcoRⅠ的识别序列和切割位点，发现AB选项的引物Ⅱ中有NdeⅠ的识别序列CA↓TATG，而AB选项的引物Ⅰ中都有EcoRⅠ的识别序列G↓AATTC，而CD中都不含，所以应选择AB。
考查方向
解题思路
对切割质粒和目的基因的两种限制酶NdeⅠ、EcoRⅠ的识别序列和切割位点进行分析，找出含有其识别序列的引物即可。