骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A(TSA)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制,为临床治疗寻找新方向。实验过程如下:
步骤1 用含青霉素和链霉素的高糖培养基,在37℃、5% CO2培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。
步骤2 取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞,用加入不同浓度的TSA(0~ 200ng·mL-1)的培养基继续培养24h。
步骤3 对各组细胞进行抽样检测,检测方法是先用台盼蓝试剂(一种细胞活性染料)染色再用血细胞计数板计数,统计细胞存活率(未染色细胞数/细胞总数×100%),结果如图1。
步骤4 分别提取TSA浓度为0 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1处理的3组细胞,测量细胞中与凋亡相关的基因(Bax、Bcl-2)和β-肌动蛋白基因(不同的组织细胞中表达相对恒定)表达的蛋白质量并计算比值,结果如图2。
49.与正常成骨细胞相比,骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移,其主要原因是 。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是 ,细胞培养箱中保持5% CO2的作用是 。
50.步骤2中,设置0 ng·mL-1 TSA实验的主要目的是 。
51.用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是 。
52.图1所示结果表明 。
53.根据图2判断,骨肉瘤细胞中 基因过度表达会加速细胞凋亡。
骨肉瘤细胞膜上的糖蛋白等物质减少 防止杂菌污染 维持培养液pH
与正常成骨细胞相比,骨肉瘤细胞容易在体内分散和转移,其主要原因是骨肉瘤细胞膜上的糖蛋白等物质减少.高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是防止杂菌污染,细胞培养箱中保持5% CO2的作用是维持培养液pH.
分析图1可知,随着处理的TSA浓度增加骨肉瘤细胞的存活率下降,说明TSA浓度增加对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用增强.分析图2可知,随着处理的TSA浓度增加,Bcl-2蛋白/β-肌动蛋白的比值降低.分析图3可知,随着处理的TSA浓度增加,Bax蛋白/β-肌动蛋白的比值升高.
动物细胞培养、细胞癌变等知识
排除非测试因素对实验结果的影响
生物学实验中通常要调置对照实验,其中空白对照实验的作用是排除非测量因素(实验自变量以外的影响实验结果的因素)对实验结果的影响.
分析图1可知,随着处理的TSA浓度增加骨肉瘤细胞的存活率下降,说明TSA浓度增加对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用增强.分析图2可知,随着处理的TSA浓度增加,Bcl-2蛋白/β-肌动蛋白的比值降低.分析图3可知,随着处理的TSA浓度增加,Bax蛋白/β-肌动蛋白的比值升高.
动物细胞培养、细胞癌变等知识
活细胞的细胞膜具有选择透过性,台盼蓝不能进入活细胞内(死细胞膜失去选择透过性,台盼蓝能进入死细胞内)
根据细胞存活率=末染色细胞数/细胞总数,可以活细胞不能被染色,即由于细胞膜具有选择透过性,台盼蓝不能进入活细胞,因此,台盼蓝是一种活性染色剂.
分析图1可知,随着处理的TSA浓度增加骨肉瘤细胞的存活率下降,说明TSA浓度增加对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用增强.分析图2可知,随着处理的TSA浓度增加,Bcl-2蛋白/β-肌动蛋白的比值降低.分析图3可知,随着处理的TSA浓度增加,Bax蛋白/β-肌动蛋白的比值升高.
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TSA浓度越高对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用越强
根据图1显示实验结果是随着处理的TSA浓度增加骨肉瘤细胞的存活率下降,说明TSA浓度增加对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用增强,注意实验结果说明(结论)不等于实验
分析图1可知,随着处理的TSA浓度增加骨肉瘤细胞的存活率下降,说明TSA浓度增加对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用增强.分析图2可知,随着处理的TSA浓度增加,Bcl-2蛋白/β-肌动蛋白的比值降低.分析图3可知,随着处理的TSA浓度增加,Bax蛋白/β-肌动蛋白的比值升高.
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Bax
图2实验结果显示,TSA浓度越高Bcl-2表达蛋白质越少,而Bax表达蛋白质越多,说明前者蛋白质是抑制细胞凋亡而后者旺盛表达促进细胞凋亡.
分析图1可知,随着处理的TSA浓度增加骨肉瘤细胞的存活率下降,说明TSA浓度增加对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用增强.分析图2可知,随着处理的TSA浓度增加,Bcl-2蛋白/β-肌动蛋白的比值降低.分析图3可知,随着处理的TSA浓度增加,Bax蛋白/β-肌动蛋白的比值升高.
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