【生物-选修3：现代生物科技专题】
已知pUC质粒上携带有IacZ+基因的一段序列，编码β-半乳糖苷酶的α肽。而宿主细胞含有IacZ+的突变基因，其产物无β-半乳糖苷酶活性，但遇α肽，可发生α-互补作用，产生有活性的酶，使培养基中的无色物质X-Gal分解，菌落呈蓝色；若将外源基因插入到质粒上IacZ+序列中，失去α-互补作用（注：宿主细胞菌落为白色）。图甲为pUC质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，tctR为四环素抗性基因，P为启动子、T为终止子，ori为复制原点。图乙表示目的基因的两端分别有EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。为获得目的菌株，请分析回答下列问题：
47.为快速筛选目的基因，应将含有目的基因的DNA与pUC质粒表达载体分别用 酶切，酶切产物用 进行连接后将得到的混合物直接导入受体菌中，培养受体菌有的未被转化（用A表示），有的被转化，被转化的菌株有三种（B含环化目的基因的菌株 C含质粒载体的菌株 D含插入了目的基因的重组质粒的菌株）。
48.为筛选出插入了目的基因的菌株，需要将宿主细胞接种在含有 的培养基中。
49.在培养基中，不能生长的菌株为 ；产生蓝色菌落的菌株为 ；产生白色菌落的菌株为 （请用（1）中的A、B、C、D字母作答）。
50.基因工程中除质粒作为基因载体外，还可用动植物病毒和 。
正确答案
EcoRⅠ DNA连接酶
解析
用上述两种限制酶同时切割目的基因后，目的基因的两个黏性末端不同，这样目的基因就不会自连城环状，同样用上述两种限制酶同时切割质粒后，质粒的两个黏性某端也不同，这样质粒也不会自连，这样当把切割后目的基因和切割后质粒混合后，只有目的基因和质粒才能相连。
为快速筛选目的基因，应将含有目的基因的DNA与pUC质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后将得到的混合物直接导入受体菌中。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
内切酶
正确答案
（无色物质）X-Gal和四环素（3，写不全0分）
解析
由题意可知，“宿主细胞含有IacZ+的突变基因，其产物无β-半乳糖苷酶活性，但遇α肽，可发生α-互补作用，产生有活性的酶，使培养基中的无色物质X-Gal分解，菌落呈蓝色”，因此为筛选出插入了目的基因的菌株，需要将宿主细胞接种在含有（无色物质）X-Gal和四环素的培养基中，观察菌落是否是白色。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
材料分析
正确答案
A、B C D
解析
由于培养基中加入四环素，因此不含抗性基因的细菌不能生长，即在培养基中，不能生长的菌株为A、B；C含质粒载体的菌株由于没有插入目的基因，因此产生蓝色菌落；若将外源基因插入到质粒上IacZ+序列中，失去α-互补作用，D含插入了目的基因的重组质粒的菌株会导致产生白色菌落。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
材料分析
正确答案
λ噬菌体衍生物
解析
基因工程中除质粒作为基因载体外，还可用动植物病毒和λ噬菌体衍生物。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
运载体