【生物—选修3：现代生物科技专题】（15分）（选做题）
Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：
24.中所选的卵母细胞应处于 期。
25.中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其 分离出ES细胞，ES细胞在形态上表现为 的特点。
26.中，需要构建含有Rag2基因的 。可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成 ，利用 技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有
酶的酶切位点。
正确答案
减数第二次分裂中（MⅡ中）
解析
核移植中细胞核的受体细胞选用成熟的卵母细胞（减数第二次分裂中期）
考查方向
核移植。
解题思路
识记题。核移植的受体细胞为成熟的卵母细胞
易错点
识记题，记到了就不容易出错。
教师点评
较基础，难度较小。
正确答案
内细胞团 体积小、细胞核大、核仁明显（3分）
解析
ES或KS细胞是来源于早期胚胎（囊胚时期的内细胞团）或原始性腺的一类细胞。在形态上的特点是体积小、核大、核仁明显；在功能上的特点是具有发育的全能性；在适宜条件下培养可增殖而不发生分化。
考查方向
干细胞的来源和特点。
解题思路
胚胎干细胞来源于早期胚胎或原始性腺，识记干细胞的三个特点。
易错点
形态特点和功能特点混淆。
教师点评
胚胎干细胞是胚胎工程的重点，考查基础知识。
正确答案
表达载体（重组质粒） 引物 PCR Hind Ⅲ和PstⅠ
解析
基因工程操作四步曲，核心步骤是：基因表达载体的构建。在该过程中用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割含目的基因的DNA，必须用HindⅢ和PstⅠ切割质粒，将目的基因插入质粒切口处，加上DNA连接酶，构建重组质粒。所以质粒必须有HindⅢ和PstⅠ切点。
用PCR技术进行目的基因的扩增，条件是目的基因（DNA）模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、Taq酶。两两种引物是根据目的基因合成短碱基序列。
考查方向
基因工程操作步骤和PCR技术。
解题思路
基因工程操作四步曲，核心步骤是：基因表达载体的构建。
用PCR技术进行目的基因的扩增，条件是目的基因（DNA）模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、Taq酶。
易错点
根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成引物不容易填，所选择的表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ切点。
教师点评
基因工程、胚胎工程、核移植等生物技术基础知识的考查，难度中等。