11．请从39、40题中选择一题做答。
39．无菌操作是微生物接种技术的关键，传统发酵技术和微生物分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。请回答下列相关问题：
（1）消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理？（ ）
①皮肤
②饮用水
③牛奶
④注射器
⑤培养皿
⑥接种环
⑦培养基
⑧果汁
⑨手术刀
A．①②③⑧
B．④⑤⑥⑦
C．①③⑦⑧⑨
D．以上全部
（2）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整 ，以保证不同微生物对生存环境的要求；对培养基要进行 ，使整个微生物的分离和培养在无菌条件下进行。
（3）在实验“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”中，使用的选择培养基本身也可以抑制或阻止其他种类的微生物生长。原理是只有能合成 的微生物才能分解尿素，而绝大多数微生物都直接利用 作为碳源。
（4）有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是 。
（5）腐乳制作的流程如下：让豆腐上长出毛霉→①→加卤汤装瓶→密封腌制。其中①过程中，应随着豆腐块层数的加高而 ，这样既能析出豆腐中的水分，又能抑制微生物生长。
40．2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家．绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。如图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：
注：图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
（1）在_________酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端可以连接起来，理由是两种不同限制酶切割后形成的_ _____是相同的。
（2）在培育绿色荧光蛋白转基因克隆猪的过程中，基因表达载体的构建是核心。一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、 、___________、标记基因等部分。
（3） 过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是______。
（4）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是___ ___。获得的转基因克隆猪，可以通过对抗原表达基因的改造从而解决的医学难题是可以避免发生______。
（5）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：______（用数字表示）。
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）
④表达出蓝色荧光蛋白
正确答案
39.（1）A
（2）调整pH 高压蒸汽灭菌
（3）脲酶 葡萄糖
（4）青霉素杀死了乳酸菌
（5）增加盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些。
40.（1）DNA连接酶 因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）
（2）启动子 终止子
（3）显微注射法 鉴定受体细胞中是否含有目的基因 （器官移植中的）免疫排斥反应
（4）②①③④
解析
39.（1）①②③⑧应采用消毒，④⑤⑥⑦⑨应采用灭菌，故选A。
（2）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整pH，培养基接种前要进行高压蒸汽灭菌，再进行倒平板。
（3）选择培养基的原理是：不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同，能合成脲酶的微生物能分解尿素，因而能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长，绝大多数微生物直接利用葡萄糖作碳源。
（4）制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素结果发酵失败，原因可能是青霉素杀死了乳酸菌。
（5）在逐层加盐腌坯的过程中,随着豆腐块层数的加高而增加盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些，这样既能析出豆腐中的水分，又能抑制微生物生长。
40. （1）限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，由此可知，由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的，因此在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端可以连接起来；
（2）一个表达载体的组成，除了目的基因、标记基因外，还有启动子和终止子等；
（3）将重组质粒导入动物细胞的方法是显微注射法；
（4）标记基因是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，获得的转基因克隆猪，可以通过对抗原表达基因的改造从而解决避免免疫排斥反应的医学难题；
（5）蛋白质工程的基本途径是：从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列→相应基因的修饰改造或人工合成→相应的表达。
考查方向
39.本题主要考查微生物的实验室分离和培养及传统发酵技术的应用，意在考查考生对消毒灭菌、培养基配制和灭菌，泡菜和腐乳制作中的注意事项等相关知识的理解。
40. 基因工程的原理、技术和应用。
解题思路
39.根据消毒、灭菌、选择培养、泡菜和腐乳制作流程等原理方法，分析作答。
40. 根据基因工程的原理、技术流程、方法等，联系课本知识作答。
易错点
39.不熟悉微生物培养中无菌操作的方法，不理解选择培养的原理，不能分析出传统发酵技术应用中出现的意外情况。
40. 对基因工程技术流程不熟悉，不能将基本原理合理迁移，解决应用问题。