纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒，下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。
据图回答：
11.本研究构建重组质粒时可选用四种限制酶，其识别序列如下图，为防止酶切片段的自身连接，可选用的限制酶组合是______或__________。
12.设置菌株Ⅰ为对照，是为了验证__________不携带纤维素酶基因。
13.纤维素酶基因的表达包括__________和__________过程。与菌株Ⅱ相比，在菌株Ⅲ、Ⅳ中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有______________________________。
14.在以纤维素为唯一碳源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，菌株___________不能存活，原因是_________________________________。
15.酵母菌生产酒精的细胞部位是___________，产生酒精时细胞的呼吸方式是___________。在利用纤维素生产酒精时，菌株Ⅳ更具有优势，因为导入的重组质粒含有____________，使分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的利用率。
正确答案
解析
为防止酶切片段自身环节，需要用不同的限制酶进行切割，且不同酶切割前后产生的粘性末端不同。限制酶①和限制酶②切割后产生的黏性末端相同，限制酶③和限制酶④切割后产生的黏性末端相同，由此可知符合题目要求的限制酶组合是①③ 、①④、②③、②④、由此可知该题的正确答案是B或C（C或B）。
考查方向
解题思路
看清题目，找出哪几个是限制酶组合，在结合题目要求选出正确答案。
易错点
不会找出相同的黏性末端，将限制酶进行配对。
正确答案
质粒DNA和酵母菌基因组
解析
选用菌株Ⅰ作为对照，将质粒DNA导入酵母菌，验证质粒DNA和酵母菌的基因组均不携带纤维素酶基因，不能产生纤维素酶。
考查方向
解题思路
找出菌株Ⅰ和其他几个菌株之间的不同点，和质粒DNA和酵母菌基因组的作用。
易错点
容易忽视质粒酵母菌基因组。
正确答案
转录； 翻译； 内质网、高尔基体
解析
基因的表达包括转录和翻译两个过程。从图中可知，菌株Ⅱ能够合成纤维素酶，单并不能分泌到细胞外，而菌株Ⅲ和菌株Ⅳ不仅可以产生纤维素酶还可以将纤维素酶分泌到细胞外，纤维素酶的本质是蛋白质，由核糖体合成，再由内质网和高尔基体进一步加工和分泌，因此相比菌株Ⅱ，菌株Ⅲ和菌株Ⅳ参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有内质网和高尔基体。
考查方向
解题思路
对课本知识的掌握熟练，由题可知菌株Ⅲ和菌株Ⅳ不仅能合成纤维素酶还能将其分泌到细胞外，再由内质网和高尔基体的加工。
易错点
不知道菌株Ⅱ与菌株Ⅲ和菌株Ⅳ的区别是后者可以将纤维素酶运输到细胞外。
正确答案
Ⅱ； 缺少信号肽编码序列，合成的纤维素酶不能分泌到胞外，细胞无可利用的碳源
解析
培养基中唯一的碳源是纤维素，因为纤维素不能进入到酵母菌细胞中，而由图可知，菌株Ⅱ中缺少信号肽编码序列，其合成的纤维素酶不能分泌到细胞外促进纤维素分解为葡萄糖。酵母菌无法得到生长所需的碳源，因此无法生长。而菌株Ⅲ和菌株Ⅳ可以分泌纤维素酶，利用纤维素分解产生的葡萄糖生长繁殖。
考查方向
解题思路
由题目可知菌株Ⅱ没有信号肽编码序列故纤维素酶无法让细胞利用。
易错点
学生无法分析出信号肽编码序列的作用。
正确答案
细胞质基质； 无氧呼吸； A基因片段
解析
酵母菌进行无氧呼吸产生酒精，无氧呼吸第二阶段，丙酮酸在各种酶的作用下分解成酒精和二氧化碳，该过程发生在细胞质基质中；比较菌株Ⅲ和菌株Ⅳ的重组质粒，菌株Ⅳ的重组质粒中多了A基因片段，且菌株Ⅳ的纤维素酶均固定在细胞壁上，相比菌株Ⅲ，培养液更换时可减少酶的流失，提高利用率。
考查方向
解题思路
结合所学无氧呼吸知识得出答案，和对重铸质粒的构造及各基因片段作用的理解。
易错点
无氧呼吸的各个步骤容易混淆，酵母菌无氧呼吸类型的判断。