选考题
[生物——选修1：生物技术实践]
某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸菌能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：（请回答82-84题）
[生物——选修3：现代生物科技专题]
图（a）中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3AI的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：（请回答85-87题）
82.分离纯化乳酸菌时，首先需要用_________________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_________________。
83.推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_________________和_________________。分离纯化时应挑选出_________________的菌落作为候选菌。
84.乳酸菌在-20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_________________（填“蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。
85.经BamHI酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。
86.若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的是____________，不能表达的原因是____________。
87.DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和____________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。
正确答案
无菌水/泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落
解析
分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释；进行梯度稀释的理由是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
梯度稀释的理由
正确答案
鉴别乳酸菌 中和产生的乳酸 具有透明圈
解析
在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和利于乳酸菌的识别和分离；分离纯化时应挑选出在平板上有溶钙圈的菌落作为候选菌。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
碳酸钙的作用
正确答案
甘油
解析
乳酸菌在-20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的甘油。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
甘油管藏
正确答案
Sau3AⅠ 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端
解析
由于限制酶Sau3AⅠ与BamHI切割后形成的黏型末端相同，所以经BamHI酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被Sau3AⅠ酶切好的产物连接。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
理由
正确答案
甲和丙/甲中目的基因插入在启动子的上游 丙中目的基因插入在终止子的下游，两者目的基因均不能转录
解析
在基因表达载体中，启动子应位于目的基因的首端，终止子鹰位于目的基因的尾端，这样目的基因才能表达。图中甲、丙均不符合，所以不能表达目的基因的产物
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
不能表达原因
正确答案
E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 T4DNA连接酶
解析
常见DNA连接酶的有E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是T4DNA连接酶。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
DNA连接酶